Diseño de un ensayo de qPCR para el estudio de la expresión de los genes reguladores de la apoptosis

Abstract

Mediante la técnica conocida como qPCR se estudia el nivel de expresión de los genes que nos interesan. Nosotros nos hemos centrado en el estudio de los genes que regulan la apoptosis, concretamente en 17 genes pertenecientes a la familia Bcl-2 e IAP. Para facilitar el estudio de su expresión génica queremos diseñar y optimizar un ensayo para qPCR. La forma común de realizar esta técnica es preparar la mezcla de reacción cada vez que se quiere hacer la qPCR, pero nosotros pretendemos diseñar y optimizar un ensayo en el que ya tengamos preparada la mezcla de reacción que contenga el SYBR Green PCR Master Mix y los primers para amplificar el gen que nos interesa. Al tener preparada la mezcla de reacción se consigue disminuir el tiempo empleado en el desarrollo de la técnica. Tras optimizar la técnica pretendemos aplicarla a dos modelos de células tumorales: células primarias de glioblastoma (resistentes a la inducción de la apoptosis) y células germinales de carcinoma testicular (sensibles a la inducción de la apoptosis). Mediante el análisis de los resultados obtenidos podremos validar el diseño del ensayo para qPCR.