Optimización del análisis del desprendimiento de CD62L por citometría de flujo y su aplicación clínica en el estudio de inmunodeficiencias y enfermedades autoinmunes

Abstract

Los defectos en la vía de señalización de los receptores TLR (Toll-Like Receptors) constituyen un grupo de enfermedades congénitas clasificadas como IEIs (Inborn Errors of Immunity), que comprometen el correcto funcionamiento de la respuesta immune innata en pacientes con mutaciones en la vía de los TLRs. Este estudio tiene como objetivo optimizar y ampliar un método diagnóstico para este grupo de enfermedades. La activación de la vía de los TLRs induce la producción de citocinas pro-inflamatorias y de interferon tipo I (IFN-I), así como el desprendimiento de CD62L (L-selectina) de la superficie de los leucocitos (shedding). El método propuesto se basa en la detección, mediante citometría de flujo, de este desprendimiento. Esto puede observarse como un descenso de la presencia de esta molécula en la superficie de los neutrófilos, y sirve como indicador the la funcionalidad de la ruta molecular. En este trabajo se examinan también los efectos del tratamiento con anifrolumab, un anticuerpo monoclonal dirigido contra los receptores del IFN-I, en la vía de los TLRs en pacientes con Lupus Cutáneo Refractario. El objetivo final es establecer un protocolo experimental para la detección de defectos de señalización en la vía de los TLRs y explorar los potenciales efectos inmunomoduladores del anifrolumab en pacientes tratados con el fármaco.

Defects in the Toll-Like Receptor (TLR) signaling pathway constitute a group of congenital diseases classified as Inborn Errors of Immunity (IEI). These defects compromise the innate immune response of patients with mutations in that specific molecular route. This study aimed to optimize and expand a diagnostic approach for this subset of IEIs based on the detection of CD62L (L-selectin) shedding in neutrophils. After TLR molecular pathway activation, the synthesis of inflammatory cytokines and Type I Interferon (IFN-I) is induced, as well as CD62L shedding from leukocytes surface. The suggested method is based on the detection, by flow cytometry, of the shedding process as a decrease of CD62L on neutrophils’ surface, working as an indicator of the pathway’s functionality. Additionally, this study examines the effects of anifrolumab treatment on the TLR molecular pathway in patients with Refractory Cutaneous Lupus Erythematosus treated with anifrolumab, a monoclonal antibody that targets the IFN-I receptor. The ultimate goal is to establish an experimental protocol for the detection of TLR signaling disorders and to explore potential immune-modulation effects on anifrolumabtreated patients.